Verletzung des Blutflusses in dem rechten pa

Totale Lungenvenenfehleinmündung

Verletzung des Blutflusses in dem rechten pa Verletzung des Blutflusses in dem rechten pa


New pharmaceutical application eine teilweise oder sogar völlige Unterbindung des Blutflusses wurden dann von dem rechten.

Die Erfindung betrifft einen neuen Gewebeplasminogen- Aktivator, dessen Kombination mit Superoxiddesmutase, pharmazeutische Formulierungen davon und die Verwendung in der Human- und Veterinärmedizin.

The invention relates to a novel tissue plasminogen activator, Verletzung des Blutflusses in dem rechten pa, its combination with Superoxiddesmutase, pharmaceutical formulations thereof and the use in human and veterinary medicine.

Es besteht ein dynamisches Gleichgewicht zwischen dem Enzym, das in der Lage ist, Blutgerinnsel zu bilden, dem Koagulationssystem und dem Enzym das in der Lage ist, Blutgerinnsel aufzulösen, dem fibrinolytischen System, welches ein intaktes Patentvaskularbett aufrecht erhält.

There exists a dynamic equilibrium between the enzyme which is capable of forming blood clots, the coagulation system and the enzyme which is capable of dissolving blood clots, the fibrinolytic system, which maintains an intact Patentvaskularbett upright. Um den Blutverlust bei Verletzungen zu inhibieren, werden Blutgerinnsel in den verletzten Gefässen gebildet. To inhibit blood loss in injury, blood clots are formed in the injured vessels.

Nach einer natürlichen Reparatur der Verletzung, werden die überflüssigen Blutgerinnsel durch die Wirkung des fibrinolytischen Systems aufgelöst.

After a natural repair of the injury, the superfluous blood clots are dissolved by the action of the fibrinolytic system. Gelegentlich bilden sich Blutgerinnsel ohne traumatische Verletzungen und können in den Hauptblutgefässen eine teilweise oder sogar völlige Unterbindung des Blutflusses bewirken. Occasionally, Verletzung des Blutflusses in dem rechten pa clots form without traumatic injury and may cause a partial or even total elimination of blood flow in the major blood Verletzung des Blutflusses in dem rechten pa. Wenn dies im Herzen, in der Lunge oder im Gehirn stattfindet, dann ist das Ergebnis ein Herzinfarkt, eine Lungenembolie oder ein Schlaganfall.

When this takes place in the heart, lung or brain, the result is a heart attack, pulmonary embolism or stroke. Diese Zustände in Kombination sind die hauptsächlichen Ursachen für die Sterbeanfälligkeit und Mortalität in den Industrienationen. These conditions in combination are the main causes of death susceptibility and mortality in the developed world.

Blutgerinnsel bestehen aus faserigem Netzwerk, welches durch das proteolytische Enzym Plasmin wieder aufgelöst werden kann. Blood clots consist of a fibrous network that can be resolubilized by the proteolytic enzyme plasmin. Dieses Enzym leitet sich von dem inaktiven Proenzym Plasminogen, einer Komponente des Blutplasmas durch die Wirkung eines Plasminogenaktivators ab. This enzyme is derived from the inactive proenzyme, plasminogen, a component of blood plasma by the action of a plasminogen activator.

Es gibt zwei immunologisch unterschiedliche Plasminogenaktivatoren bei Säugern. There are two immunologically distinct plasminogen activators in mammals. Der Intrinsik-Plasminogenaktivator, der auch als Urokinase bekannt ist, ist ein von den Nieren produziertes Enzym und kann aus Urin gewonnen werden. The intrinsic plasminogen activator, also known as urokinase, Verletzung des Blutflusses in dem rechten pa, is produced by the kidneys and enzyme can be extracted from urine.

Er kann auch in einer Anzahl von Gewebekulturquellen hergestellt werden. It can also be produced in a number of tissue culture sources. Der Extrinsik-Plasminogenaktivator, der auch als vaskularer Plasminogenaktivator bekannt ist und als Gewebeplasminogenaktivator t-PAkann aus zahlreichen Gewebehomogenaten vor allen Dingen humanem Uterusden vaskularen Zellwänden und aus einigen Zellkulturen isoliert werden.

The Extrinsik plasminogen activator, also known as vascular plasminogen activator and as tissue plasminogen Verletzung des Blutflusses in dem rechten pa t-PAcan be isolated from many tissue homogenates human above all, uterusVerletzung des Blutflusses in dem rechten pa vascular cell wall and from some cell cultures. Ein Hauptnachteil bei sowohl Urokinase und Streptokinase besteht darin, dass diese im gesamten Kreislauf aktiv sind und nicht nur an den Stellen eines Blutgerinnsels.

A major drawback with both urokinase and streptokinase is that they are active throughout the circulation and not just at the points of a blood clot. You can, for example, Verletzung des Blutflusses in dem rechten pa, other blood proteins, such as fibrinogen, prothrombin, factor V and factor VIII, destroy and so reduce the clotting ability and increasing the risk of bleeding, Verletzung des Blutflusses in dem rechten pa.

Im Gegensatz hierzu hängt die biologische Aktivität von t-PA von dem Vorhandensein von Fibrin, an welches es sich bindet und wo es aktiviert wird, ab. In contrast, the biological activity of t-PA by the presence of fibrin to which it binds and where it is activated, depends. Die maximale Aktivität wird deshalb nur an den Stellen eines Blutgerinnsels entwickelt, dh in Gegenwart von Fibrin wird das Netzwerk aufgelöst und dadurch wird in erheblichem Masse das Risiko einer Blutung vermieden, Verletzung des Blutflusses in dem rechten pa.

The maximum activity is therefore developed only at the sites of a blood clot, ie in the presence of fibrin, the network is resolved, and thereby the risk of bleeding is avoided to a considerable extent. The interruption of the blood flow in a vessel leading to the onset of ischemia in general. Bei diesem Zustand wird dem Gewebe Sauerstoff vorenthalten und wird dadurch gefährdet und dies ergibt einen Zustand, bei dem das Gewebe verletzt, aber noch im wesentlichen lebensfähig ist.

In this state the tissue is deprived of oxygen and is jeopardized thereby, and this results in a state in which the injured tissue, but still is substantially viable. Wenn dieser Zustand aber während eines Zeitraums von beispielsweise 3 oder mehr Stunden beibehalten wird, dann wird das Gewebe nekrotisch und dieser Zustand kann, wenn er einmal eingetreten ist, nicht wieder behoben werden.

If this condition is however maintained for a period of, for example 3 or more hours, then the tissue becomes necrotic and this condition can, once it has occurred, can not be fixed again. Es ist deshalb wichtig, dass eine Reperfusion, dh eine Wiederherstellung des Blutstroms, Verletzung des Blutflusses in dem rechten pa, so schnell wie möglich stattfindet, um das Gewebe zu retten, bevor es permanent geschädigt wird. It is therefore important that reperfusion, ie the restoration of blood flow Verletzung des Blutflusses in dem rechten pa place as soon as possible to save the tissue before it is permanently damaged.

Ironischerweise ergibt die Reperfusion selbst, selbst wenn man sie durchführt, bevor das Gewebe nekrotisch wird, einen Komplex von Phänomenen, einschliesslich Verletzung des Blutflusses in dem rechten pa putativen Bildung eines Superoxidradikals, welches einen verheerenden Einfluss auf hypoxisches Gewebe hat. Ironically, the reperfusion results in itself, even if it is carried out before the tissue is necrotic, a complex of phenomena, including the putative formation of superoxide radical, which has a devastating effect on hypoxic tissue.

Infolgedessen kann eine Reperfusion immer nur partiell zu einer Wiederherstellung des gefährdeten Gewebes führen, wobei der Rest permanent durch das Auftreten von einem oder mehreren dieser Phänomene geschädigt bleibt. As a result, reperfusion can still only partially lead to a restoration of the tissue at risk, with the balance remains permanently damaged by the occurrence of one or more of these phenomena.

Es wurde nun gefunden, Verletzung des Blutflusses in dem rechten pa, dass t-PA den Schaden bei gefährdetem Gewebe während einer Reperfusion inhibiert, indem es gegen eines oder mehrere der vorerwähnten Phänomene schützt. It has now been found that t-PA inhibits the damage to endangered tissue during reperfusion by protecting against one or more of the above-mentioned phenomena.

Der Mechanismus der Wirkung von t-PA und der Erzielung dieses Schutzes ist bisher noch nicht aufgeklärt worden, ist jedoch unabhängig von seiner Wirkung als thrombolytisches Mittel. The mechanism of action of t-PA and the achievement of this protection has not yet been elucidated, but is independent of its effect as a thrombolytic agent.

Diese neuentdeckte Eigenschaft ermöglicht somit, dass t-PA oder eine pharmazeutische Formulierung davon als ein Inhibitor gegenüber dem Schaden von gefährdetem Gewebe unter den vorgenannten Umständen verwendet wird. This newly discovered property thus allows t-PA or a pharmaceutical formulation thereof is used as an inhibitor against the damage of endangered tissue under the aforementioned circumstances.

Die Erfindung betrifft somit The invention thus relates. Obwohl die vorliegende Erfindung angewendet werden kann, Verletzung des Blutflusses in dem rechten pa, um jegliches gefährdete Gewebe zu schützen, ist es ganz besonders geeignet, um Schäden bei gefährdetem Myocardgewebe zu inhibieren.

Although the present invention can be applied to protect any vulnerable tissue, it is particularly suitable to inhibit damage to myocardial tissue endangered. Das bei der vorliegenden Erfindung zu verwendende t-PA kann irgendein Verletzung des Blutflusses in dem rechten pa Protein, das im wesentlichen dem Säugetier- und Verletzung des Blutflusses in dem rechten pa Human-t-PA entspricht, sein und schliesst Formen mit und ohne Glycosilation ein.

The to be used in the present invention, t-PA may be any bioactive protein substantially corresponding to mammalian, and especially human t-PA to be, and includes forms with and without a Glycosilation. Es kann ein- oder zweikettiges t-PA sein oder eine Mischung davon, Verletzung des Blutflusses in dem rechten pa, wie dies in EP-A-1 12 beschrieben wird, und im Falle von vollständig glycosiliertem Human-t-PA hat es ein scheinbares Molekulargewicht auf Polyacrylamidgel von etwa It may be one- or two-chain t-PA or a mixture thereof, as described in EP-A-1 12and in the case of fully glycated human t-PA, it has an apparent molecular weight on polyacrylamide gel of about 70, and an isoelectric point between 7.

Vorzugsweise hat das t-PA eine spezifische Aktivität von etwa Aminosäuresequenz von t-PA entspricht vorzugsweise im wesentlichen der in Fig. Diese Sequenz ist somit identisch mit der von Fig. This sequence is thus identical to that of FIG. Insbesondere ist die Sequenz identisch mit der von Fig. In particular, the sequence is identical to that of Fig. The amino acid sequence shown in Fig. Basierend auf einer Analogie mit anderen Proteinen, deren Struktur in grösserem Detail bestimmt wurde, wird die postulierte Struktur für die Sequenz die sich aus der Disulfid-Brückenbildung ergibt zwischen der Aminosäure in der Stellung und der Prolin- C-Endgruppe in Fig.

Based on analogy with other proteins whose structure has been determined in more detail, the postulated structure for the sequence arising from disulphide bond formation results between the amino acid in the 90th position and the proline C-terminal in Fig. Die Struktur der N-Endgruppenregion ist weniger sicher, obwohl hier einige Verletzung des Blutflusses in dem rechten pa gemacht worden sind Progress in Fibrinolysis,6, ; und Proc.

The structure of the N-Endgruppenregion is less certain, though here are some suggestions have been made Progress in Fibrinolysis,6, ; And Proc Natl Acad Sci,81, Aminosäure und zwischen der Aminosäuredie für die Bindung welche Krampfadern bei Männern Proteins an Fibrin verantwortlich sind, und die Serinprotease-Region, welche den Hauptteil der B-Kette ausmacht und die für die Aktivierung von Plaminogen verantwortlich ist.

The most important feature of the structure of t-PA are the two "kringle" regions between the 92nd and the rd amino acid, and between the th and st amino acidwhich are responsible for the binding of the protein to fibrin, and the serine protease region, which constitutes the main part of the B-chain and which is responsible for the activation of plasminogen.

In t-PA erscheinen diese in den Stellungenund Die Disulfid-Brücken zwischen den Cysteinaminosäureresten ist ebenfalls wichtig, weil sie die A- und die B-Ketten in der zweikettigen Form von t-PA zusammenhält. In t-PA these appear in the positionsand Die t-PA kann nach irgendeinem Verfahren, das aus dem Stand der Technik bekannt ist, hergestellt werden. The t-PA may be by any method which is known from the prior art can be manufactured. For example, they can gain from normal or neoplastic cell lines of the type described in Biochimica et Biophysica Acta,EP-A or EP-A It is particularly preferred that ovary of Chinese hamster cells CHO are used for the production of t-PA and that it gains in the in Molecular and Cellular Biology,5 7: In this way, the cloned gene is cotransfected with the gene which dihydrofolate reductase dhfr into dhfr - CHO cells encoding.

Transformanzien entsprechend dhfr werden von einem Medium ohne Nucleoside ausgewählt und werden ansteigenden Konzentrationen von Methotrexat ausgesetzt. Transformanzien be correspondingly dhfr selected from one medium without nucleosides and increasing concentrations of methotrexate are exposed.

The dhfr and t-PA genes are koverstärkt in this way and result in stable cell lines which are able to express high levels of t-PA. The t-PA is preferably purified by one of the methods known from the prior art, for. Chem,6; ibid,13; ibid,13; Eur.

Biochem, Ein besonders geeignetes Beispiel für eine solche Kombination ist die Kombination mit Superoxiddismutase SODeinem Enzym, das bekanntlich Superoxidradikale, also eines der Phänomene, welches Gewebeschäden verursacht, einfängt und zerstört.

A particularly suitable example of such a combination is the combination with superoxide dismutase SODan enzyme that is known to superoxide radicals, that is one of the phenomena that causes tissue damage which captures and destroyed.

The combination of t-PA and SOD results in a particularly advantageous means both for the removal of blood clots and for inhibiting damage to endangered tissue during a subsequent reperfusion. Das in Kombination mit t-PA verwendete SOD kann irgendein bioaktives Protein sein, das im wesentlichen einer oder mehreren Gruppen der allgemein unter diesen Namen bekannten Enzyme entspricht. The SOD used in combination with t-PA may be any bioactive protein substantially corresponding to one or more groups of the generally known under the name enzymes.

Es stammt vorzugsweise von einem Säuger und insbesondere von einem Rind oder Menschen und kommt im allgemeinen mit einem Metallkation, mit dem es normalerweise klassifiziert wird, vor. The iron and manganese forms of SOD are both bacterial origin and have a molecular weight of about 40, and are dimers.

The manganese form of SOD is of eukaryotic origin and the other hand has a molecular weight of about 80, and is a tetramer. Das Kupferkation ist an vier Histidinreste per Untereinheit als Ligand gebunden und das Zinkkation ist zwischen Histidin und Asparaginsäure als Ligand gebunden. The copper cation is bonded to four histidine residues per subunit as a ligand and the Bananen mit Krampfadern cation is bound between histidine and aspartic acid as the ligand.

The molecular weights of the various forms of SOD were determined using sedimentation, molecular sieves and using polyacrylamide gels.


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